Purificación y caracterización de la beta-amilasa

La ß-amilasa se purificó y caracterizó a partir de Bacillus subtilis aislado de semillas fermentadas de Parkia biglobosa. La purificación se logró mediante cromatografía de intercambio iónico con columna DEAE y cromatografía de filtración en gel (Sephadex G-200). Se investigaron los efectos de la temperatura, el pH y el tiempo de producción sobre la producción de ß-amilasa, al tiempo que se investigaron las características fisicoquímicas de la enzima purificada. La producción óptima de ß-amilasa se obtuvo a una temperatura, pH y tiempo de 37 °C, 7,0 y 24 h, respectivamente. Los resultados mostraron que la ß-amilasa purificada tenía más actividad enzimática que las muestras crudas de Bacillus subtilis, por lo que la actividad de la enzima cruda era de 3,21 mM/min/ml, mientras que la enzima purificada tenía una actividad mejorada de 21,46 mM/min/ml. Se determinó que los valores óptimos de temperatura y pH de la amilasa purificada eran 50 °C y pH 5,0, respectivamente. La estabilidad del pH de la enzima oscilaba entre pH 4,0 y 9,0. A pH 5,0 y 7,0, conservaba el 70 % y el 60 % de su actividad, respectivamente, después de 5 h de incubación. La estabilidad de la temperatura osciló entre 40 °C y 70 °C, pero fue más estable a 50 °C, conservando el 64 % de su actividad tras 1 h de incubación. La enzima mostró una actividad máxima sobre el almidón soluble y la sacarosa.