Purificação e caracterização da beta-amilase

A ß-amilase foi purificada e caracterizada a partir de Bacillus subtilis isolado de sementes fermentadas de Parkia biglobosa. A purificação foi realizada utilizando coluna de troca iónica DEAE e cromatografia de filtração em gel (Sephadex G-200). Foram investigados os efeitos da temperatura, pH e tempo de produção na produção de ß-amilase, enquanto as características físico-químicas da enzima purificada foram investigadas. A produção ideal de ß-amilase foi obtida a uma temperatura, pH e tempo de 37 °C, 7,0 e 24 h, respetivamente. Os resultados mostraram que a ß-amilase purificada tinha mais atividade enzimática do que as amostras brutas de Bacillus subtilis, em que a atividade da enzima bruta era de 3,21 mM/min/ml, enquanto a enzima purificada tinha uma atividade melhorada de 21,46 mM/min/ml. Os valores ótimos de temperatura e pH da amilase purificada foram 50 °C e pH 5,0, respetivamente. A estabilidade do pH da enzima variou entre pH 4,0 e 9,0. Em pH 5,0 e 7,0, ela manteve 70% e 60% da sua atividade, respetivamente, após 5 h de incubação. A estabilidade da temperatura variou entre 40 °C e 70 °C, mas foi mais estável a 50 °C, mantendo 64% da sua atividade após 1 hora de incubação. A enzima exibiu atividade máxima em amido solúvel e sacarose.